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氣相液氮運輸罐短期儲存胚胎的可行性研究材料和方法(下)

時間:2019-05-21 13:35來源: 作者:班德液氮罐 點擊:
1.6胚胎冷凍   自增壓液氮罐
采用玻璃化冷凍的方法。先將l mol/L的DMso在寶溫下平衡,DAP2 1 3和冷凍管(NuncCryoTllbe 1.0 lI】1)在O℃平衡。將要冷凍的胚胎移入1 mol/L的DMSO的液滴里,讓其自然沉到液滴底部,重復3次以盡可能地去除HTF。將5肛11 mol/L的DMSO和胚胎一同移入提前預冷的冷凍管中,O℃平衡5 s后,加入45 ul的DAP213,再在O℃平衡5s,將冷凍管裝到冷凍管夾直接投入液相液氮罐。第二天將冷凍管從液相液氮罐轉入到氣相液氮運輸罐,存放14 d后放回液相液氮罐。每種品系均留一個冷凍管的胚胎不放入氣相液氮運輸罐,作為對照。

1.7胚胎復蘇
將冷凍管從液相液氮罐中取出,倒出冷凍管里的液氮,在室溫卜.放置20s。加入37℃預熱的0.25Ino兒蔗糖0.9 rnl,迅速吸取注入10次,將蔗糖和胚胎移到培養皿里,再往冷凍管里加O.25 TI】ol/L蔗糖O.45 IIll,回收胚胎。將形態正常的胚胎在HTF里洗3次以充分吸取冷凍保護液,最后移入HTF液滴里培養,并計數。培養1 h后進行移植。

1.8移植
在移植前一天下午挑出8周齡以上發情期lcR小鼠與結扎的ICR雄性小鼠合籠。第二天挑出有陰栓的雌性小鼠做移植用。移植采用輸卵管移植。一般在移植后的第20天分娩,計數。

1.9統計方法
用卡方檢驗對兩組數據進行分析比較,P.<0.05為差異顯著。自增壓液氮罐
 
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