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無細胞百日咳攻擊菌的制備及液氮保存方法分析

時間:2019-05-09 10:29來源: 作者:班德液氮罐 點擊:
【摘 要】為了制備無細胞百日咳效價測定用攻擊菌并用液氮進行保存,對此方法進行評價。采用原代攻擊菌復蘇傳代后測定細菌濃度,并用蛋白胨水稀釋為27億個菌/ml,分裝凍存管中。放入液氮罐內,并對液氮保存的攻擊菌進行相應的檢測,用統計軟件計算。結果顯示,此方法制備的攻擊菌與傳統的攻擊菌無顯著性差異,凍后雖攻擊菌的毒力有所下降,但都在100~1000/MLD的正常范圍內,且凍后0、3、6、9、12月無顯著性差異。同批支間差異小,CV<5% 。通過此方法制備的攻擊菌穩定性好,試驗結果符合《中華人民共和國藥典》要求,可用于無細胞百日咳的效價測定。

【關鍵詞】無細胞百日咳攻擊菌;液氮保存;方法分析  自增壓液氮罐

作為無細胞百日咳效價測定攻擊用的菌種,長期以來都是每次試驗前現開菌種的方式,這樣既麻煩,又浪費菌種,還有可能造成批間的效力試驗差異很大。甚至可能因攻擊菌不成立,導致試驗失敗。這樣浪費動物、人力、時間。

為此,實驗用事先制備攻擊菌低溫保存的方法來解決這些問題。制備及保存微生物具有容易變異的特性,因此在保藏過程中,必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態,才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力,Mery-man(1956)曾引證在-130℃將無生化活性發生。據此可采用液氮保存攻擊菌。自增壓液氮罐
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